01

为了评估在培养开始时以不同比例结合CD4+和CD8+T细胞对最终CAR-T细胞产物的扩增和CD4:CD8组成的影响。研究者从健康供者和复发B细胞淋巴瘤患者收集PBMCs中分离出CD4+和CD8+细胞。这些细胞以不同比例混合，用1.5.3-NQ-28-BB-z(第三代抗CD20 CAR)慢病毒载体转导，在第7天用辐照的CD20+细胞系重新刺激，以促进CAR+细胞生长，并在第14-15天收获。

与单独培养的CD8+细胞相比，健康供者和患者在第7天和第14天，CD8+CAR-T细胞与CD4+细胞混合的倍数扩增明显更高。CD8+细胞的扩增与CD4+细胞的增加呈正相关，而CD4+细胞的扩增在很大程度上不受共培养的影响。制造结束时CD4+和CD8+细胞的比例与起始比例成正比。研究者并且使用第二代CD19靶向CAR(hCD19-BB-z)重复验证了此结果。

CD4+和CD8+CAR-T细胞共培养对细胞生长和细胞产物组成的影响

图源 | jitc.bmj.com

02

鉴于CD4+细胞对CD8+CAR-T细胞扩增的这些深远影响，研究者继续探究了CD8+细胞是否可能表现出表型和功能差异。因此，研究者采用了两种制造工艺:

(1)14-15天的工艺，在第7天使用CD20+靶细胞进行再刺激；

(2)8-9天的工艺，不进行再刺激。

在第8天(没有再刺激)或第14天(CD20+再刺激后)，与共培养的细胞相比，在没有CD4+细胞的情况下培养的CD8+ CAR-T细胞表现出较低的扩增后与记忆相关的标志物水平和较低的分化状态，以及较高的衰竭和终末分化标志物水平。在CD8+T细胞亚群中，CD27+/PD-1-细胞比例较高的CD19 CAR-T细胞产物能够让更多的CLL患者临床缓解。在混合CD4:CD8培养中，CD27+/PD-1-CD8+细胞的百分比显著增加，而且无论采用何种培养方法，CD4+CAR-T细胞的免疫表型大部分相似。

CD8+ CAR-T细胞单独培养与CD4+ T细胞共培养的表型差异

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